Glutathione levels in and total antioxidant capacity of Candida sp. cells exposed to oxidative stress caused by hydrogen peroxide / Níveis de glutationa e capacidade antioxidante total em células de Candida sp. expostas a estresse oxidativo causado por peróxido de hidrogênio

INTRODUCTION: The capacity to overcome the oxidative stress imposed by phagocytes seems to be critical for Candida species to cause invasive candidiasis. METHODS: To better characterize the oxidative stress response (OSR) of 8 clinically relevant Candida sp., glutathione, a vital component of the intracellular redox balance, was measured using the 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid (DTNB)-glutathione disulfide (GSSG) reductase reconversion method; the total antioxidant capacity (TAC) was measured using a modified method based on the decolorization of the 2,2'-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic) acid radical cation (ABTS*+). Both methods were used with cellular Candida sp. extracts treated or not with hydrogen peroxide (0.5 mM). RESULTS: Oxidative stress induced by hydrogen peroxide clearly reduced intracellular glutathione levels. This depletion was stronger in Candida albicans and the levels of glutathione in untreated cells were also higher in this species. The TAC demonstrated intra-specific variation. CONCLUSIONS: Glutathione levels did not correlate with the measured TAC values, despite this being the most important non-enzymatic intracellular antioxidant molecule. The results indicate that the isolated measurement of TAC does not give a clear picture of the ability of a given Candida sp. to respond to oxidative stress.

INTRODUÇÃO: A capacidade de suportar o estresse oxidativo imposto por fagócitos parece ser crítica para que espécies de Candida causem candidíase invasiva. MÉTODOS: Para melhor caracterizar a resposta ao estresse oxidativo (REO) de oito Candida sp. clinicamente relevantes, um componente vital do balanço redox intracelular, a glutationa, foi mensurada pelo método de reconversão DTNB-GSSG redutase e a capacidade antioxidante total (CAT) foi mensurada por um método modificado baseado na descoloração do ABTS*+. Ambos os métodos foram utilizados em extratos celulares das espécies de Candida tratadas ou não com peróxido de hidrogênio (0,5mM). RESULTADOS: O estresse oxidativo induzido pelo peróxido de hidrogênio claramente reduziu os níveis intracelulares de glutationa. Esta diminuição foi mais intensa em C. albicans e os níveis de glutationa em células não tratadas foram também maiores nesta espécie. A capacidade antioxidante total demonstrou variação intraespecífica na capacidade antioxidante. CONCLUSÕES: Os níveis de glutationa não se correlacionaram com a capacidade antioxidante total mensurada, apesar desta ser a defesa antioxidante intracelular não-enzimática mais importante. Os resultados indicam que a medição isolada da CAT não fornece um quadro claro da habilidade de certa espécie de Candida responder ao estresse oxidativo.

High levels of catalase in sod mutants of Saccharomyces cerevisiae in high aeration conditions

Saccharomyces cerevisiae deficientes nos genes da superóxido dismutase (mutantes sod1D, sod2De sod1Dsod2D) cultivados em fase estacionária sob condições de alta aeração foram submetidos ao estresse com peróxido de hidrogênio (H2O2). Todos os mutantes mostraram-se sensíveis após o tratamento com o H2O2. A enzima glutationa peroxidase (GPx) apresentou níveis significativamente mais baixos nos simples mutantes sod1D e sod2D que na cepa selvagem sem tratamento. Após, a exposição a diferentes concentrações de H2O2, os níveis da glutationa peroxidase aumentaram no duplo mutante sod1Dsod2D e no simples mutante sod2D, enquanto o mutante sod1D manteve baixa atividade da glutationa peroxidase. O mutante sod2D demonstrou atividade da catalase similar a da cepa selvagem sem tratamento, enquanto foi observado que a atividade da catalase decresceu em condições de baixa aeração. O duplo mutante sod1Dsod2D apresentou baixa atividade da catalase mesmo sem tratamento. Os níveis da catalase foram maiores em condições de alta aeração do que em condições microaerófilas, inclusive o duplo mutante sod1Dsod2D contém menos H2O2, visto que, a SOD catalisa a clivagem do superóxido produzindo H2O2 e oxigênio. Nós sugerimos neste trabalho que a catalase não é essencial para os mutantes sod sob condições normais, mas ela participa de uma importante via na aquisição da tolerância ao estresse oxidativo induzido por condições de alta aeração.